تاثیر ترکیبات فرار باکتری های اندوفیت بر کموتاکسی و توانایی تشکیل بیوفیلم توسط باکتری Agrobacterium tumefaciens
کد مقاله : 1253-24IPPC (R2)
نویسندگان
1گروه گیاه پزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان
2عضو هیات علمی گروه گیاهپزشکی دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان
3گروه زراعت و اصلاح نباتات، دانشکده کشاورزی،دانشگاه کردستان
4عضو هیئت علمی گروه باغبانی دانشکده کشاورزی، دانشگاه کردستان
چکیده
باکتری های اندوفیت ترکیبات آلی فرار متنوعی تولید می نمایند که می‌توانند کموتاکسی و توانایی تشکیل بیوفیلم بیمارگر را تحت تاثیر قرار دهند. کموتاکسی و تشکیل بیوفیلم یکی از مراحل اساسی در بیماریزایی Agrobacterium tumefaciens است. در پژوهش حاضر تاثیرترکیبات آلی فرار تولید شده توسط باکتری اندوفیت جداشده از تاکهای استان کردستان بر توانایی تشکیل بیوفیلم و کموتاکسی در این بیمارگر مورد بررسی قرار گرفت. به منظور بررسی توانایی تشکیل بیوفیلم، ده میکرولیتر از کشت 24 ساعته سویه های اندوفیت (cfu/ml-1108×1) در یک بخش از پتری دیش چند قسمتی حاوی محیط کشت NAکشت داده شد. در بخش دیگر پتری دیش میکروتیوب حاوی 190 میکرولیتر محیط کشت مایع LB و تلقیح شده توسط 10 میکرولیتر باکتری بیمارگر (cfu/ml-1107×1) بصورت عمودی قرار داده شد. بعد از 24 ساعت نگه داری در دمای اتاق، 25 میکرولیتر محلول کریستال ویوله 1 درصد به میکروتیوب ها اضافه گردید و در دمای اتاق به مدت 15 دقیقه نگه داری شد. سپس میکروتیوب ها در دو نوبت با اضافه نمودن 200 میکرولیتر اتانول 95 درصد شستشو داده شد و هربار به میکروتیوب تمیز منتقل گردید. در نهایت حجم حاصل با اضافه نمودن آب مقطر سترون به یک میلی لیتر رسید و میزان جذب نوری در طول موج 540 نانومتر اندازه گیری گردید. در آزمون کموتاکسی، در یک قسمت از پتری دیشهای سه قسمتی، محیط کموتاکسی (1 میلی لیتر EDTA 0.1 مولار + 10 میلی لیتر K2HPO4 1 مولار+ 0.35 درصد آگار) تهیه گردیده و پس از تعبیه حفره ای به قطر 5 میلی متر مقدار 50 میکرولیتر عصاره ریشه تاک ریخته شد. سپس 10 میکرولیتر از باکتری بیمارگر(غلظت 7CFU/ml-110×1) در فاصله 40 میلی متر از حفره قرار داده شد. در بخش دیگر پتری دیش باکتری اندوفیت (غلظت CFU/ml-1 108 ×1) کشت گردید. بعد از 24 ساعت نگه داری در دمای 28 درجه سانتی گراد، تعداد سلولهای باکتری بیمارگر جذب شده به سمت حفره حاوی عصاره اندازه گیری شد. در هر دو آزمون از بیمارگری که تحت تاثیر ترکیبات فرار قرار نگرفته بودند به عنوان کنترل استفاده شد. آزمون‌ها در قالب طرح کاملاً تصادفی با سه تکرار اجرا گردید. در نهایت داده ها با استفاده از نرم افزار SAS مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. نتایج مقایسه میانگین داده ها در آزمون بیوفیلم نشان داد که سویه‌های Pseudomonas sp. OU17, Ou22, Ou38, Ba35, Sa15، Serratia sp. Ba10, Ou55, Ou50، Enterobacter sp. Ou23، Erwinia sp. Sv8, Sa59، Micrococcus sp. Sv71 و Rathayibacter sp. Ma5 بصورت معناداری بیشترین تاثیر را بر کاهش تشکیل بیوفیلم نشان دادند. در آزمون کموتاکسی ترکیبات فرار تولید شده توسط سویه های Pseudomonas sp. Mi49, Sa33, Ou22, Sv69، Serratia sp. Ba10، Enterobacter sp. Ou80، Erwinia sp. Sa59، و Pantoea sp. Sa14 دارای بیش ترین تاثیر بازدارندگی از حرکت سلولهای آگروباکتریوم به سمت عصاره ریشه بودند.
کلیدواژه ها