ردیابی و تعیین خصوصیات بیولوژیکی و فیلوژنتیکی ویروس وای سیب زمینی (PVY) جدایه استان لرستان

کد مقاله : 1667-24IPPC (R3)
نویسندگان
1گروه بیماری شناسی گیاهی، واحد خرم آباد، دانشگاه آزاد اسلامی، خرم آباد، ایران
2گروه بیماری شناسی گیاهی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد خرم آباد، خرم آباد، ایران
3گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه لرستان، خرم آباد، ایران
چکیده
بیماری‌های ویروسی از جمله عوامل محدود کننده تولید سیب‌زمینی در جهان می‌باشند. ویروس Y سیب‌زمینی (PVY) گونه جنس Potyvirus از خانواده Potyviridae یکی از مهم‌ترین بیماری‌های محصول سیب‌زمینی می‌باشد. این ویروس دارای ساختمان رشته‌ای وRNA تک رشته‌ای مثبت بوده و از طریق مکانیکی و همچنین توسط شته سبز هلو Myzus persicae به‌صورت ناپایا منتقل می‌شود. به منظور ردیابی ویروس، تعداد 135 نمونه از گیاهانی که علائم موزائیک، کوتولگی، موجی بودن حاشیه برگ، لکه‌های کلروتیک و تغییر شکل برگ را نشان می‌دادند، از مزارع مختلف سیب‌زمینی شهرستان خرم‌آباد جمع‌آوری شد. عصاره گیاهان مشکوک روی گیاهان محک Nicotiana glutinosa و N. occidentalis مایه‌زنی شدند. پس از حدود ده روز علایم نکروز، رگبرگ روشنی و موزائیک به‌طور سیستمیک در نمونه‌های مایه‌زنی شده مشاهده گردید. از گیاهان محک دارای علائم، استخراجRNA کل صورت گرفت و با استفاده از آزمون RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی ژن پروتئین پوششی ویروسPVY ، باندی در محدوده bp1115 تکثیر شد و آلودگی نمونه‌ها به ویروس PVY اثبات شد. قطعه تکثیر شده به شرکت ماکروژن کره جنوبی ارسال و تعیین توالی شد. بررسی‌های فیلوژنتیکی نشان داد که جدایه ایرانی مورد مطالعه دارای 98 تا 2/99 درصد همسانی ژنتیکی با دیگر توالی‌های ثبت شده در این ناحیه در پایگاه اطلاعاتیNCBI می‌باشد. براساس درخت فیلوژنی رسم شده با استفاده از نرم‌افزار MEGA7، جدایه ردیابی شده از استان لرستان در کنار جدایه‌های مربوط به کشور آلمان و یک جدایه ایرانی مربوط به استان فارس قرار گرفت. توالی نوکلئوتیدی قطعه مورد نظر در پایگاه اطلاعاتی NCBI به شماره دسترسی MT655949 با نام جدایه IAU-Lorestan ثبت گردید. این اولین گزارش از آلودگی مزارع سیب‌زمینی استان لرستان به ویروسPVY به کمک آزمایشات مولکولی می‌باشد.
کلیدواژه ها
 
Title
Detection and determination of biological and phylogenetic characteristics of Potato virus Y (PVY) isolate of Lorestan province
Authors
Abstract
Viral diseases are among the factors limiting potato production in the world. Potato virus Y (PVY) from Potyvirus species of Potyviridae family is one of the most important diseases of potato crop. This virus has a filamentous structure and positive single-stranded RNA and is transmitted mechanically as well as by the green aphid Myzus persicae in non-permanent manner. In order to detect the virus, 135 samples of plants that showed signs of mosaic, dwarf, wavy leaf margin, chlorotic spots and leaf deformation were collected from different potato farms of Khorramabad. Suspicious plant extracts were inoculated on Nicotiana glutinosa and N. occidentalis indicator plants. After about ten days, signs of necrosis, vein clearing and mosaic were observed in the inoculated samples. Total RNA was extracted from symptomatic indicator plants and the band in the range of 1115 bp was amplified using RT-PCR and specific primers of PVY coat protein gene and PVY contamination of the samples was confirmed.. The amplified fragment was sent to Macrogen Company of South Korean and sequenced. Phylogenetic studies showed that the studied Iranian isolate has 98 to 99.2% genetic similarity with other sequences recorded in this area in the NCBI database. Based on the phylogenetic tree drawn using MEGA7 software, Lorestan isolate was placed in a group next to the isolates related to Germany and an Iranian isolate related to Fars province. The nucleotide sequence of this fragment was recorded in the NCBI database with accession number MT655949 under the name of IAU-Lorestan isolate. This is the first report of PVY contamination of potato fields in Lorestan province using molecular tests.
Keywords
diagnosis, Isolation, molecular, Potyvirus