ارزیابی برخی جدایه‌های باکتریایی مرتبط با ریشه بر نماتد Meloidogyne javanica در شرایط آزمایشگاه

کد مقاله : 1922-24IPPC (R2)
نویسندگان
1گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه یاسوج
2گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی دانشگاه یاسوج
3گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه یاسوج، یاسوج، ایران
چکیده
نماتدهای ریشه‌گرهی (Meloidogyne spp.) گسترده‌ترین نماتدهای انگلی هستند که باعث بروز خسارت در بسیاری از گیاهان می‌شوند. با توجه به محدودیت‌های زیست محیطی در استفاده از نماتدکش برای مهار آن‌ها، اخیراً مهار زیستی مورد توجه فزاینده‌ای قرار گرفته است. برخی از باکتری‌های مرتبط با ریشه، متابولیت‌هایی را تولید و ترشح می‌کنند که بر نماتدهای بیماری‌زای گیاهی اثر مهار کنندگی داشته (اثر مستقیم) یا اثر نماتدهای بیماری‌زای گیاهی را به طور غیرمستقیم از طریق افزایش مقاومت گیاه، کاهش می‌دهند. در مطالعه حاضر، اثر باکتری‌های مرتبط با ریشه بر میزان تفریخ تخم و مرگ و میر لارو سن دوم نماتد M. javanicaدر شرایط آزمایشگاهی مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور 35 سویه باکتری از فراریشه گیاهان گوجه‌فرنگی، بادمجان، فلفل دلمه‌ای و هندوانه سالم و همچنین بادمجان و پسته آلوده به نماتدهای ریشه‌گرهی استخراج و خالص سازی شد. سپس 100 عدد تخم یا لارو سن دوم M. javanica به طور جداگانه به تشتک‌های پتری حاوی 10 میلی لیتر سوسپانسیون باکتریایی با غلظت 107 سلول اضافه شد و در شرایط کنترل شده در دمای 27 درجه سلسیوس نگهداری شد. در تیمار شاهد از آب مقطر استریل استفاده شد. پس از 120 ساعت تعداد تخم‌های تفریخ شده شمارش شد. همچنین پس از 48 ساعت لاروهای سن دوم بدون حرکت جدا و در حجم کمی از آب قرار داده شدند. سپس به منظور بازگشت علائم حیاتی نماتدهای زنده، این سوسپانسیون نماتد بر روی کاغذ صافی واتمن شماره یک درون تشتک پتری حاوی آب مقطر ریخته شد و در نهایت تعداد لاروهای سن دوم بدون حرکت (مرده) پس از 24 ساعت شمارش گردید. هر دو آزمایش در قالب طرح کاملاً تصادفی با سه تکرار انجام شد. نتایج نشان داد که پس از 120 ساعت، سویه‌های Pseudomonas sp. I01، Pseudomonas sp. I02 و Bacillus sp. به ترتیب 5/79، 8/77 و 4/69 درصد تفریخ تخم را نسبت به شاهد کاهش دادند. همچنین سویه‌های Pseudomonas sp. I01، Bacillus sp. و Clostridium sp.با افزایش 149، 131 و 120 درصدی مرگ و میر لارو سن دوم نسبت به شاهد، به عنوان مؤثرترین سویه‌ها تعیین شدند. لازم به ذکر است که شناسایی مولکولی و فنوتیپی سویه‌های موثر در حال انجام است.
کلیدواژه ها
 
Title
Evaluation of some root-associated bacteria on hatching and mortality of second stage juveniles of Meloidogyne javanica under laboratory conditions
Authors
Saeid Mahdi, Habiballah Charehgani, Rasool Rezaei
Abstract
Root-knot nematodes (Meloidogyne spp.) are the most widespread parasitic nematodes, causing damage of numerous crops. Due to environmental restrictions on nematicidal use for their controlling, biological control has recently gained increasing interest. Certain root-associated bacteria produce and excrete metabolites that are inhibitory to plant pathogenic nematodes (direct effect) or decrease the effect of plant pathogenic nematodes indirectly through increase in plant-resistance. In the present study, the effect of root-associated bacteria was studied on the egg hatching and the second stage juvenile (J2s) mortality of M. javanica under laboratory condition. For this purpose, 35 strains of bacteria were extracted and purified from rhizosphere of healthy tomato, eggplant, bell pepper and watermelon plants, as well as eggplant and pistachio infected with root-knot nematodes. Then 100 eggs or J2s of M. javanica were separately added to petri dishes containing 10 ml of bacterial suspension with a concentration of 107 cells and kept under controlled conditions at 27 °C. Sterile distilled water was used in the control treatment. After 120 hours, the number of hatched eggs was counted. Also, after 48 hours, immobile J2s were concentrated in small volumes of sterilized water. The suspension was filtered using a petri dish containing filter paper (Whatman no. 1) for recovering alive nematodes. Immobile (dead) nematodes were counted after 24 hours. Both experiments were performed in a completely randomized design with three replications. The results showed that after 120 hours, Pseudomonas sp. I01, Pseudomonas sp. I02 and Bacillus sp. reduced egg hatching by 79.5, 77.8 and 69.4 percent, respectively, as compared to the control. Also, Pseudomonas sp. I01, Bacillus sp. and Clostridium sp. were determined to be the most effective strains on J2s mortality of M. javanica by increasing 149, 131 and 120 percent, respectively, as compared to the control. It should be noted that molecular and phenotypic identification of effective isolates are under determination.
Keywords
Egg hatching, Juvenile mortality, Microbial community, Root-knot nematode